Low-level laser irradiation promotes proliferation of cryopreserved adipose-derived stem cells / Laser de baixa intensidade promove proliferação de células-tronco derivadas de tecido adiposo criopreservadas

ABSTRACT Objective To evaluate the effect of low-level laser irradiation on proliferation and viability of murine adipose-derived stem cells previously submitted to cryopreservation. Methods Adipose-derived stem cells were isolated from inguinal fat pads of three mice, submitted to cryopreservation in fetal bovine serum with 10% dimethylsulfoxide for 30 days and then thawed and maintained in normal culture conditions. Culture cells were either irradiated or not (control) with an InGaAIP diode laser at zero and 48 hours, using two different energy densities (0.5 and 1.0J/cm2). Cell proliferation was evaluated by trypan blue exclusion method and MTT assay at intervals of zero, 24, 48, and 72 hours after the first laser application. Cell viability and apoptosis of previously cryopreserved cells submitted to laser therapy were evaluated by flow cytometry. Results The Irradiated Groups (0.5 and 1.0J/cm2) showed an increased cell proliferation (p<0.05) when compared to the Control Group, however no significant difference between the two energy densities was observed. Flow cytometry revealed a percentage of viable cells higher than 99% in all groups. Conclusion Low-level laser irradiation has stimulatory effects on the proliferation of adipose-derived stem cells previously submitted to cryopreservation.

RESUMO Objetivo Avaliar o efeito do laser de baixa intensidade na proliferação e na viabilidade de células-tronco derivadas de tecido adiposo murinas previamente submetidas à criopreservação. Métodos Células-tronco derivadas de tecido adiposo foram isoladas da região inguinal de três camundongos, submetidas à criopreservação em soro fetal bovino com 10% de dimetilsulfóxido por 30 dias e, depois, descongeladas e mantidas em condições normais de cultivo. As células cultivadas foram irradiadas ou não (controle) com um laser de diodo InGaAIP nos intervalos de zero e 48 horas, utilizando duas densidades de energia diferentes (0,5 e 1,0J/cm2). A proliferação celular foi avaliada pelo método de exclusão de azul de tripan e ensaio MTT, nos intervalos de zero, 24, 48 e 72 horas após a primeira aplicação do laser. A viabilidade celular e a apoptose das células previamente criopreservadas submetidas à laserterapia foram avaliadas por citometria de fluxo. Resultados Os Grupos Irradiados (0,5 e 1,0J/cm2) apresentaram aumento da proliferação celular (p<0,05) quando comparados ao Grupos Controle, porém não foi observada diferença significativa entre as duas densidades de energia. A citometria de fluxo revelou percentagem de células viáveis superior a 99% em todos os grupos. Conclusão O laser de baixa intensidade tem efeitos estimuladores sobre a proliferação de células-tronco derivadas de tecido adiposo previamente submetidas à criopreservação.

Modulation of in vitro osteoclast activity mediated by different doses of parathyroid hormone / Modulación in vitro de la actividad osteoclástica mediada por diferentes dosis de hormona paratiroidea

Bone remodeling is a process regulated by the interaction between cells and various molecules such as parathyroid hormone (PTH). The aim of the study was to evaluate the effect of different doses of PTH on osteoclast activity in a culture model of bone organs. Six-day-old male C57BL/6 mice (n=14) were euthanized and the calvariae were dissected and sectioned in the middle, keeping the periosteal and endosteal. The bone fragments were divided into three groups: Group I (control - without adding PTH), Group II (addition of 3 nM PTH) and Group III (30 nM PTH), all cultured in aMEM for up to 72 h osteoclast activity was evaluated by biochemical quantification of calcium released in the culture medium at intervals of 24, 48, and 72 h and by histomorphometric analysis of bone resorption lacunae at 72 h our results show that group II exhibited significantly higher values of calcium levels in the medium compared to group I (p<0.05) in all intervals, also being higher for group III at 24 hours (p<0.05). Group II promoted a greater demineralization area (22068 ± 2193 mm2) than those found in group I (2084 ± 38 mm2) and group III (8952 ± 246 mm2), with statistically significant difference (p<0.001) among all groups. We concluded that in culture model of bone organs PTH promotes higher bone resorption when administered in lower doses.

La remodelación ósea es un proceso regulado por la interacción entre las células y varias moléculas como la hormona paratiroidea (PTH). El objetivo de este estudio fue evaluar el efecto de diferentes dosis de PTH sobre la actividad de los osteoclastos en un modelo de cultivo de órganos óseos. Se sacrificaron ratones C57BL/6 machos, de 6 días de edad (n = 14), y se disecaron y seccionaron las calvarias, manteniendo el periostio y endostio. Los fragmentos óseos se dividieron en tres grupos: Grupo I (control - sin adición de PTH), Grupo II (adición de 3 mM de PTH) y Grupo III (30 nM de PTH), todos cultivados en aMEM hasta 72 horas. La actividad de los osteoclastos se evaluó mediante la cuantificación bioquímica de calcio liberado en medio de cultivo, a intervalos de 24, 48 y 72 horas, y por análisis histomorfométrico de las lagunas de resorción ósea a las 72 horas. Nuestros resultados muestran que el grupo II exhibió valores significativamente más altos de calcio en el medio, comparado con el grupo I (p <0.05) en todos los intervalos, siendo también más alto para el grupo III a las 24 horas (p <0.05). El grupo II promovió una mayor área de desmineralización (22068 ± 2193 mm2) que los encontrados en el grupo I (2084 ± 38 mm2) y en el grupo III (8952 ± 246 mm2), con diferencia estadísticamente significativa (p <0,001) entre todos los grupos. Concluimos que en el modelo de cultivo de órganos óseos la PTH promueve una mayor resorción ósea cuando se administra en dosis más bajas.

Fibroma gingival de células gigantes de tamaño inusual / Gingival giant cell fibroma of unusual size

Giant cell fibroma is a benign oral fibrous tumor and it is typically an asymptomatic sessile or pedunculated mass that is usually less than 1 cm in diameter. The lesion consists of uninflamed fibrous tissue in which there are numerous large uninucleated or multinucleated spindle- and stellate-shaped cells with prominent basophilic cytoplasm. The purpose of this paper is to report a case of a gingival giant cell fibroma of abnormal size. A 31-year-old white woman was referred to the dental service for evaluation of a growth on the mandibular gingival. The intraoral examination revealed a 3.0 × 1.5 cm exophytic gingival mass located in the lingual gingiva of the right mandibular permanent first and second molars. The differential diagnosis included peripheral ossifying fibroma, peripheral giant cell granuloma, and giant cell fibroma. Complete surgical excision of the lesion was performed and the diagnosis of giant cell fibroma was made. No complications or recurrence of the lesion have been noted after 4 years of follow-up. Although giant cell fibromas are benign lesions in which simple surgical excision is curative, it is very important that dental and medical professionals recognize it in light of the frequency of occurrence and the need for a precise diagnosis(AU)

El fibroma de células gigantes es un tumor fibroso benigno de la mucosa bucal que típicamente se presenta como una masa asintomática sésil o pediculada generalmente menos de 1 cm de diámetro. La lesión consiste en tejido fibroso no inflamado en el que se encuentran numerosas células fusiformes y estrelladas de gran tamaño, mononucleares o multinucleadas con prominente citoplasma basófilo. El propósito de este trabajo es describir el caso de un fibroma gingival de células gigantes de tamaño inusual. Una mujer blanca de 31 años de edad se presentó al servicio dental para la evaluación de un crecimiento en la encía mandibular. El examen clínico intrabucal reveló una masa gingival exofítica de 3,0 cm x 1,5 cm situado en la encía lingual en el área de los primeros y segundos molares permanentes mandibulares del lado derecho. El diagnóstico diferencial incluyó fibroma osificante periférico, granuloma periférico de células gigantes y fibroma de células gigantes. Se realizó la escisión quirúrgica completa de la lesión y el diagnóstico definitivo fue de fibroma de células gigantes. No se han observado complicaciones o recurrencia de la lesión después de 4 años de seguimiento. Aunque los fibromas de células gigantes son lesiones benignas en las que la escisión quirúrgica simple es curativa, es muy importante que los profesionales dentales y médicos reconozcan la necesidad de un diagnóstico preciso en vista de la frecuencia de aparición(AU)

Low-level laser irradiation induces in vitro proliferation of mesenchymal stem cells / Laser de baixa intensidade induz à proliferação in vitro de células-tronco mesenquimais

Objective : To evaluate the effect of low-level laser irradiation on the proliferation and possible nuclear morphological changes of mouse mesenchymal stem cells. Methods : Mesenchymal stem cells derived from bone marrow and adipose tissue were submitted to two applications (T0 and T48 hours) of low-level laser irradiation (660nm; doses of 0.5 and 1.0J/cm2). The trypan blue assay was used to evaluate cell viability, and growth curves were used to analyze proliferation at zero, 24, 48, and 72 hours. Nuclear alterations were evaluated by staining with DAPI (4’-6-diamidino-2-phenylindole) at 72 hours. Results : Bone marrow-derived mesenchymal stem cells responded to laser therapy in a dose-dependent manner. Higher cell growth was observed when the cells were irradiated with a dose of 1.0J/cm2, especially after 24 hours (p<0.01). Adipose-derived mesenchymal stem cells responded better to a dose of 1.0J/cm2, but higher cell proliferation was observed after 48 hours (p<0.05) and 72 hours (p<0.01). Neither nuclear alterations nor a significant change in cell viability was detected in the studied groups. Conclusion : Low-level laser irradiation stimulated the proliferation of mouse mesenchymal stem cells without causing nuclear alterations. The biostimulation of mesenchymal stem cells using laser therapy might be an important tool for regenerative therapy and tissue engineering. .

Objetivo : Avaliar o efeito da terapia com laser de baixa intensidade sobre a proliferação e as possíveis alterações morfológicas nucleares em células-tronco mesenquimais de camundongos. Métodos : Células-tronco mesenquimais derivadas da medula óssea e do tecido adiposo foram submetidas a duas aplicações (T0 e T48 horas) de laser de baixa intensidade (660nm; doses de 0,5 e 1,0J/cm2). O ensaio de azul de tripan foi utilizado para a avaliação da viabilidade celular, e curvas de crescimento foram usadas para avaliar a proliferação das células em zero, 24, 48, e 72 horas. Alterações nucleares foram avaliadas por coloração com DAPI (4-6-diamidino-2-fenilindolo) em 72 horas. Resultados : As células-tronco mesenquimais derivadas da medula óssea responderam a terapia com laser de forma dose-dependente. Um maior crescimento celular foi observado quando as células foram irradiadas com dose de 1,0J/cm2, especialmente depois de 24 horas (p<0,01). As células-tronco mesenquimais derivadas do tecido adiposo responderam melhor à dose de 1,0J/cm2, com maior proliferação após 48 (p<0,05) e 72 horas (p<0,01). Nem alterações nucleares nem a mudança significativa na viabilidade celular foi detectada nos grupos estudados. Conclusão : Laser de baixa intensidade estimulou a proliferação de células-tronco mesenquimais sem causar alterações nucleares. A bioestimulação de células-tronco mesenquimais por laserterapia pode ser uma ferramenta importante para a terapia regenerativa e a engenharia tecidual. .

Cell adhesion in bone grafts associated to nanotechnology: a systematic review

Introduction: Tissue engineering aims at the development of biological substitutes that can restore, maintain, or improve the functionality of damaged tissue or organs. To this end, molecular and cellular interactions may influence the tissue reactions to biomaterials. In order to be effective and integrated to the receiving area, the bone graft is required to allow a strong cell adhesion, interacting with several molecules to induce migration, differentiation, and thus the mineralization of the new bone on the graft. These cell adhesion molecules (CAM) will mediate the contact between two cells or between cells and the extracellular matrix, an essential process to the success of the implant. Objective: This paper is a systematic review of the literature on the mechanisms of cell adhesion to bone grafts associated to nanotechnology, describing the importance and the role of those molecules in the adhesion and thus in tissue regeneration. Literature review: After the use of search strategies, 18 articles that describe processes of cell adhesion to bone grafts were selected. Results: The main reported mechanisms involve cell adhesion molecules (CAMs) and extracellular matrix components. Conclusion: Several molecules are involved in the process of cell adhesion to bone grafts, highlighting the role of integrins, the focal adhesion mechanism, the influence of the collagen matrix, and the activity of alkaline phosphatase in bone matrix formation. Accurate identification of these mechanisms of cell adhesion is essential for further advancement in tissue engineering, such as the production of biological bone substitutes that achieve a better clinical outcome.

Oral angioleiomyoma: a case report and considerations on differential diagnosis / Angioleiomioma oral: relato de caso e considerações no diagnóstico diferencial

Angioleiomyomas are benign mesenchymal tumors derived from smooth muscle, which rarely occur in the oral cavity. We report a case of an angioleiomyoma occurring in the maxillary gingiva. The lesion was painless, with a lobulated surface, fibrous in consistency, and firm upon palpation. Microscopic examination showed an encapsulated tumor mass composed of large vascular channels of varying calibers, surrounded by thick walls of irregularly arranged, spindle-shaped cells, which were immunopositive for smooth-muscle actin. It is sometimes difficult to differentiate an angioleiomyoma from other spindle-cell tumors, thus we emphasize its histological differential diagnosis.

Angioleiomiomas são tumores mesenquimais benignos derivados de músculo liso que raramente ocorrem na cavidade oral. Relatamos um caso de angioleiomioma na gengiva maxilar. A lesão era indolor, com superfície lobulada, consistência fibrosa e firme à palpação. O exame histológico mostrou massa tumoral encapsulada, composta por grandes canais vasculares de diferentes calibres, circundados por paredes espessas de células fusiformes dispostas de forma irregular, as quais se apresentavam imunopositivas para actina de músculo liso. A distinção entre angioleiomioma e outros tumores de células fusiformes algumas vezes é difícil e, por essa razão, enfatizamos seu diagnóstico diferencial histológico.

Proliferation of human periodontal ligament mesenchymal cells on polished and plasma nitriding titanium surfaces

Aim: To evaluate the proliferative capacity of mesenchymal cells derived from human periodontalligament on polished and plasma-treated titanium surfaces. Methods: Eighteen titanium disks werepolished and half of them (n=9) were submitted to plasma nitriding using the cathodic cage technique.Mesenchymal cells were isolated from periodontal ligament of impacted third molars (n=2) andcultured on titanium disks (polished and nitrided) and on a plastic surface as a positive control of cellproliferation. Cell proliferation was analyzed and growth curves were constructed for the differentgroups by determining the number of cells adhered to the different surfaces at 24, 48 and 72 h afterplating. Results: Higher cell number was observed for the nitrided surface at 24 and 48 h.However, no statistically significant difference in cell proliferation was observed between the twodifferent surface treatments (p>0.05). Conclusions: We concluded that plasma nitriding producedsurfaces that permitted the proliferation of human periodontal ligament mesenchymal cells. Associatedto other physical and chemical properties, it is possible to assume the feasibility of plasma nitridingmethod and its positive effect on the early cellular events of osseointegration.

Rendimento de células, esenquimais do tecido adiposo submetidas a diferentes protocolos de extração / Adipose-derived mesenchymal cells yield under different cell extraction protocols

Objetivo: Estabelecer um protocolo de extração de células mesenquimais do tecido adiposo, a partir da avaliação do rendimento celular em dois métodos de digestão enzimática do tecido. Material e Métodos: Fragmentos de tecido adiposo foram extraídos da região inguinal de camundongos e processados por dois protocolos distintos: Grupo 1 – digestão enzimática com colagenase I; Grupo 2 – digestão enzimática com colagenas e I e tripsina/EDTA, ambos por 1 hora a 37°C.No terceiro subcultivo (P3) as células dos dois grupos foram submetidas a contagem em Câmara de Neubauer para avaliação da proliferação celular e obtenção da curva decrescimento nos intervalos de 24, 48 e 72 horas. Foi realizada a marcação pelo DAPI no intervalo de 72 horas, nos grupos estudados, para avaliar a existência de danos morfológicos nucleares. Os dados foram analisados estatisticamente, com nível de significância de 5%. Resultados: Os dois grupos exibiram um padrão de crescimento celular ascendente. As médias das contagens celulares demonstraram uma maior proliferação celular no grupo I, com diferença estatisticamente significante entre os grupos nos intervalos de 48 e72 horas (p<0,05). Alterações morfológicas nucleares não oram observadas nos grupos. Conclusão: A digestão enzimática do tecido adiposo por colagenase I, sem associação com a tripsina, proporcionou melhor rendimento das células mesenquimais, o que favorece a escolha desse protocolo em experimentos com este tipo celular.

Objective: To establish a protocol for extraction of adipose derivedmesenchymal cells, evaluating the cell yield in twomethods of tissue enzymatic digestion. Material and Methods:Fragments of adipose tissue were removed from the inguinal region of mice and processed by two different protocols:Group 1 - enzymatic digestion with collagenase I; Group 2 -enzymatic digestion with collagenase I and trypsin/EDTA,both for 1 hour at 37°C. In the third passage (P3), cells fromboth groups were counted in a Neubauer chamber forevaluation of cell proliferation, and growth curves were plottedat intervals of 24, 48 and 72 hours. The DAPI nuclear stainingwas performed in both groups in a 72-hour interval to evaluatethe presence of nuclear morphological damage. Data wereanalyzed statistically with a significance level of 5%. Results:The two groups showed an upward pattern of cell growth.The mean cell counts showed a higher cell proliferation ingroup I, with a statistically significant difference betweengroups in intervals of 48 and 72 hours (p<0.05). Nuclearmorphological changes were not observed in the groups.Conclusion: The enzymatic digestion of adipose tissue bycollagenase I, without association with trypsin, improves theyield of mesenchymal cells, what suggests the choice ofthat protocol in experiments with this cell type.

Rendimento de células mesenquimais do ligamento periodontal humano submetidas a diferentes protocolos de criopreservação / Yield of human periodontal ligament mesenchymal cells under different protocols of cryopreservation

Introdução: A técnica de criopreservação tem como característica cessar reversivelmente todas as funções biológicas dos tecidos vivos em baixas temperaturas e tem sido aplicada a diversas células humanas, visando à sua utilização posterior. Objetivo: Avaliar a proliferação de células mesenquimais do ligamento periodontal humano após a criopreservação por dois diferentes protocolos. Método: As células do ligamento periodontal foram obtidas a partir de dois dentes (terceiros molares) hígidos, com indicação de remoção cirúrgica. Após o processamento, as células foram cultivadas em placas de Petri e mantidas a 37 °C em 5% de CO2, até atingirem 70-90% de confluência, com troca de meio a cada três dias. Na primeira passagem, as células foram divididas em dois grupos e criopreservadas: Grupo -80 °C - criopreservação em ultrafreezer por 45 dias; Grupo -196 °C - criopreservação em nitrogênio líquido por 45 dias. Decorrido esse tempo, as células dos dois grupos foram descongeladas e plaqueadas para o experimento. A curva de crescimento dos grupos estudados foi traçada a partir de contagem em Câmara de Neubauer e pelo método de ensaio do MTT, nos intervalos de 24, 48 e 72 horas. Os resultados foram analisados por meio do teste de Mann-Whitney, com nível de significância de 5%. Resultado: Verificou-se um crescimento ascendente nos dois protocolos utilizados, porém uma maior taxa proliferativa foi verificada no grupo criopreservado em nitrogênio líquido (p < 0,05). Conclusão: Ambos os protocolos de criopreservação estudados foram eficazes, porém a criopreservação em nitrogênio líquido (-196 °C) manteve uma maior taxa de proliferação celular em todos os intervalos de tempo.

Introduction: Cryopreservation aims to stop reversibly the biological functions of living tissues at low temperatures, and is an important resource for the storage of human cells for later use. Aim: To assess the proliferation of mesenchymal cells from human periodontal ligament cryopreserved by two different protocols. Method: Periodontal ligament cells were obtained from third molars with an indication for surgical removal. After processing, cells were grown and maintained at 37 °C in 5% CO2 until they reached 70-90% confluency, with medium changing every three days. In the first passage cells were divided into two groups, according to the protocol used: Group -80 °C - cryopreserved in ultrafreezer for 45 days, Group -196 °C - cryopreserved in liquid nitrogen for 45 days. After this time, cells from both groups were thawed and plated for the experiment. The growth curve of the groups was drawn from counting cells in a Neubauer chamber and by the MTT assay method, in the intervals of 24, 48 and 72 hours. The data were analyzed using the Mann-Whitney test with a significance level of 5%. Result: There was an upward cell growth in both protocols used, but a higher proliferative rate was observed in group cryopreserved in liquid nitrogen (p < 0.05). Conclusion: Cryopreservation has proven to be an effective technique for the storage and of mesenchymal cells from the periodontal ligament, especially when stored at a temperature of -196 °C.

Use of Clinical Cases in a Virtual Learning Environment as an Approach to Teaching Human Embryology / Uso de Casos Clínicos en Ambiente Virtual como Estrategia de Enseñanza de la Embriología Humana

The objective of this study was to evaluate the effectiveness of virtual learning as an approach to teaching human embryology. For this purpose, clinical cases comprising the six major topics of human embryology were organized into a blog in order to complement the content discussed in the classroom. Scientific articles were made available to reinforce theoretical contents and ethical-humanistic issues were addressed in discussion forums. The mean grades of the students at the end of the semester were compared with those of the previous semester when the method had not been applied. Student perceptions of blog effectiveness were evaluated using an electronic questionnaire. A substantial increase in mean grades was observed compared to the previous class. Analysis of the questionnaires showed that the students considered the blog to be a practical and useful learning tool. In conclusion, the use of clinical cases in a virtual learning environment is an effective tool to teach human embryology.

El objetivo del trabajo fue evaluar la eficacia de un método de enseñanza de la Embriología en ambiente virtual. Para complementar el contenido discutido en clases, fueron organizados en un blog, casos clínicos abordando seis ejes temáticos de Embriología Humana. Artículos científicos estuvieron disponibles para consolidación de los contenidos teóricos y el eje ético-humanístico fue abordado en foros de discusión. Al final del semestre la media de las notas de los alumnos fue comparada con la media de un semestre anterior donde la metodología no fue utilizada. La percepción de los alumnos con relación a la eficacia del uso del blog en el aprendizaje fue evaluada a través de un cuestionario electrónico. Se observó aumento considerable de la media de las notas al ser comparadas con las notas del período lectivo anterior. El análisis de los cuestionarios reveló que los alumnos consideraron el blog como un instrumento práctico y útil de aprendizaje. Se concluye que esta metodología representó una herramienta eficiente em la enseñanza de los contenidos de Embriología Humana.

Influência de um protocolo de criopreservação no rendimento in vitro de células-tronco derivadas do tecido adiposo / Effect of a cryopreservation protocol on the in vitro yield of adipose-derived stem cells

INTRODUÇÃO: O tecido adiposo obtido por lipoaspiração pode ser uma fonte acessível de células-tronco, para posterior aplicação clínica na regeneração tecidual. O processo de criopreservação mantém essas células vivas por longos períodos, sem prejuízo a suas funções. O objetivo deste estudo foi avaliar a influência de um protocolo de criopreservação na proliferação das células-tronco derivadas do tecido adiposo. MÉTODO: Fragmentos de tecido adiposo de camundongos foram submetidos a digestão enzimática e as células foram cultivadas em meio α-MEM (do inglês Minimum Essential Medium), suplementado com 10% de soro fetal bovino (SFB), e mantidas a 37ºC em 5% de dióxido de carbono. No primeiro subcultivo, uma alíquota de 1x10(6) células foi criopreservada em SFB com 10% de dimetilsulfóxido por 30 dias, e outro grupo permaneceu em cultura. No terceiro subcultivo, as células dos dois grupos (não-criopreservadas e criopreservadas) foram plaqueadas e a viabilidade celular e as curvas de crescimento foram estabelecidas a partir de contagem em hemocitômetro e pelo ensaio de MTT, nos intervalos de 24 horas, 48 horas e 72 horas. A avaliação da morfologia nuclear foi realizada pela marcação por DAPI. Os dados foram analisados estatisticamente, com nível de significância de 5%. RESULTADOS: Observou-se padrão de crescimento celular ascendente em ambos os grupos, sem diferença significante ao longo do experimento (P > 0,05). Não houve alteração considerável da viabilidade celular e danos nucleares também não foram observados nos grupos estudados. CONCLUSÕES: O protocolo de criopreservação avaliado mostrou-se eficaz para manter a integridade das células-tronco de tecido adiposo, permitindo seu armazenamento para uso posterior.

BACKGROUND: Adipose tissue obtained by liposuction may be an accessible source of stem cells for future clinical application in tissue regeneration. Cryopreservation maintains stem cells in a live state for long periods of time, without impairing their function. The aim of this study was to assess the effect of a cryopreservation protocol on the proliferation of adipose-derived stem cells. METHODS: Fragments of mouse adipose tissue were subjected to enzymatic digestion in order to isolate cells that were then cultured in minimum essential medium (α-MEM) supplemented with 10% fetal bovine serum (FBS). Cells were maintained at 37°C in 5% carbon dioxide (CO2). At the first passage, an aliquot of 1 × 10(6) cells was cryopreserved in FBS with 10% dimethylsulfoxide (DMSO) for 30 days, whereas the remaining cells were seeded and maintained in culture. When these cells reached the third passage, the 2 groups of cells (cryopreserved and non-cryopreserved) were seeded for experiments. Cell viability and proliferation curves were established at intervals of 24, 48, and 72 hours by counting cells with a hemocytometer and MTT assay. Nuclear morphology was assessed by DAPI staining. The data were statistically analyzed, with a significance level of 5%. RESULTS: Increasing cellular proliferation was observed in both groups, with no significant difference throughout the experiment (P > 0.05). There was no significant change in cell viability and signs of nuclear damage were not detected in both the groups studied. CONCLUSIONS: The cryopreservation protocol analyzed was effective for maintaining the integrity of adipose-derived stem cells, allowing their storage for later use.

Influência do envelhecimento no rendimento in vitro de células-tronco mesenquimais da medula óssea de camundongos / Influence of aging on the in vitro yield of mice bone marrow mesenchymal stem cells

Objetivo - Avaliar a influência do processo de envelhecimento sobre a capacidade de adesão e proliferação das células mesenquimais da medula óssea de camundongos, comparando-se dois grupos de animais: jovens (30 dias de idade) e senis (18 meses de idade). Métodos - Extratos de medula óssea foram coletados do canal medular de tíbia e fêmur de camundongos jovens (n=5) e senis (n=5) e as células mesenquimais foram cultivadas em meio de cultura alfa-MEM nos intervalos de 24, 48 e 72 horas. Resultados - Observou-se uma curva crescente de proliferação celular nos animais jovens, enquanto nos animais senis houve uma grande redução no número de células no intervalo de 72 horas.Conclusão - A idade do animal é um fator importante no rendimento in vitro de células mesenquimais da medula óssea nos períodos iniciais do cultivo, o que pode influenciar no resultado dos experimentos com este tipo celular.

Objective - To evaluate the influence of aging on the adhesion and proliferation of mesenchymal cells from mice bone marrow, comparing two groups: young (30 days old) and senile (18 months old) animals. Methods - Extracts of bone marrow were collected from the marrow cavity of the tibia and femur of young (n=5) and senile (n=5) mice and the mesenchymal cells were cultured in MEM for intervals of 24, 48 and 72 hours. Results - It was found an increased curve of cell proliferation in young animals while in senile animals there was a large reduction in cell number in the 72 hours period. Conclusion - The animal's age is an important factor in the in vitro yield of from bone marrow mesenchymal cells in the early periods of culture, which may influence the results of experiments with this cell population.

Bone marrow mesenchymal cell adhesion to polished and nitrided titanium surfaces

Aim: To evaluate the adhesion of mouse bone marrow mesenchymal cells (MBMMC) on differenttitanium surfaces. Methods: Grade II titanium discs (ASTM F86) received two different surfacetreatments: polished (S1) and cathodic cage plasma nitriding (S2). MBMMC were cultured ontitanium discs in 24-well cell culture plates, at a density of 1 x 104 cells per well. After 24 h, theadhesion was evaluated using a hemocytometer. Results: The mean adhesion was greater onS2, though without statistically significant difference from S2 (p>0.05). Conclusions: It wasdemonstrated that titanium surface treatment with ionic nitriding in a cathodic cage is biocompatiblesince it preserved the integrity of the cultivated MBMMC for a period of 24 h, allowing theiradhesion.

Influência da vitamina D na atividade osteoclástica em um modelo de cultura de órgãos ósseos / Influence of vitamin D on osteoclastic activity in a bone organ culture model

INTRODUÇÃO: A remodelação óssea é regulada por várias citocinas e hormônios, como a vitamina D3. Essa vitamina, em particular, regula positiva e negativamente a expressão do ligante do receptor ativador do fator nuclear kappa-B (RANKL) e da osteoprotegerina (OPG), respectivamente, e é usada como um indutor da formação de osteoclastos in vitro. OBJETIVO: Estudar o efeito da vitamina D (VitD) sobre a atividade osteoclástica em cultura de calvárias. MATERIAL E MÉTODO: Fragmentos de calvária de camundongos foram cultivados com meio básico (controle) ou com meio contendo VitD (10 nM: baixa dose; 100 nM: alta dose). Após os intervalos de 24, 48 e 72 horas, o meio de cultura foi coletado para dosagem de cálcio e os fragmentos foram fixados para análise em microscopia confocal. RESULTADOS: Observou-se que a adição de VitD nas duas dosagens promoveu aumento nos níveis de cálcio no meio, porém só foram encontradas diferenças estatisticamente significativas entre alta e baixa dose no intervalo de 24 horas. Na microscopia, foram observadas áreas de desmineralização mais amplas nos fragmentos de calvária cultivados com altas doses de VitD. CONCLUSÃO: A VitD promove aumento da atividade osteoclástica in vitro, de modo concentração-efeito.

INTRODUCTION: Bone remodeling is controlled by various cytokines and hormones, such as vitamin D3, which regulates receptor activator of nuclear factor kappa-B ligand (RANKL) and osteoprotegerin (OPG) expression levels positively and negatively. It is also used as an inducer of osteoclast formation in vitro. OBJECTIVE: To evaluate the effect of vitamin D (VitD) on osteoclastic activity in cultured calvariae. MATERIAL AND METHOD: Fragments of mice calvaria were cultured in basic medium (control) or VitD-containing medium (10 nM: low dose; 100 nM: high dose). After intervals of 24, 48 and 72 hours, the culture medium was collected for calcium measurement and the fragments were fixed for confocal microscopy. RESULTS: It was observed that the addition of vitamin D in both concentrations promoted an increase of calcium levels in the medium. Nonetheless, statistically significant differences between high and low doses were detected only in the 24-hour interval. In the microscopic analysis, areas of demineralization were more extensive among calvariae cultured with high doses of VitD. CONCLUSION: VitD increases osteoclastic activity in vitro in a dose-dependent effect.

Importância dos tecidos dentais e periodontais como fontes de células-tronco / Importance of dental and periodontal tissues as sources of stem cells

Objetivo: o presente estudo consiste de uma revisãosistemática sobre os estudos com células-tronco dentais eperiodontais, relatando os resultados obtidos nosexperimentos, bem como seu potencial de aplicação naOdontologia. Material e Métodos: a pesquisa bibliográficadeste trabalho foi realizada nos bancos de dados eletrônicos(Pubmed, Science Direct e Scielo), complementada pelabusca manual de artigos referenciados. Resultados: aliteratura consultada mostrou que os tecidos dentais eperiodontais podem ser uma fonte autógena fácil e eficientede células-tronco, com capacidade de expansão e dediferenciação em fibroblastos, cementoblastos eosteoblastos. Entre as células-tronco dentais e periodontais,as células-tronco da polpa de dentes decíduos (SHED) sãoas que apresentam maior potencial de diferenciação celular.Conclusão: existe um grande avanço nos experimentos comcélulas-tronco adultas provenientes de tecidos bucais; o seufácil acesso e o fato de não serem órgãos vitais constituemum atrativo para uso em técnicas da bioengenharia, além dopotencial clínico na regeneração tecidual.

Objective: This study consists on a systematic review ofliterature on dental and periodontal stem cells. Resultsobtained from the experiments are reported as well as thepotential application of stem cells in Dentistry. Material andMethods: literature search was performed in electronicdatabases (Pubmed, Science Direct and Scielo), togetherwith manual search of references from retrieved articles.Results: literature shows that dental and periodontal tissuesmay be easy and efficient autologous sources of stem cells,which are capable of expansion and differentiation intofibroblasts, cementoblasts and osteoblasts. Among the dentaland periodontal stem cells, the ones from deciduous teethpulp (SHED) are considered to have the highest potential fordifferentiation. Conclusion: there is a great progress inexperiments with adult stem cells derived from oral tissues;their easy access and the fact that those are not vital organsare attractive for using them in bioengineering techniques, inaddition to their clinical potential for tissue regeneration.

Adesão de células do ligamento periodontal de ratos a diferentes superfícies de titânio: estudo comparativo in vitro / Adhesion of ligament periodontal cells to different titanium surfaces: an in vitro comparative study

Objetivo: o presente estudo teve como objetivo avaliar, através de experimentos in vitro utilizando cultura celular, a capacidade de adesão das células do ligamento periodontal de ratos sobre as superfícies de titânio polidas e tratadas por nitretação iônica (plasma). Método: foram utilizados discos de titânio grau II ASTM F86 nas dimensões de 15mm de diâmetro por 1,5mm de espessura, os quais receberam diferentes tratamentos de superfície em 2 grupos distintos: polido e nitretado a plasma por gaiola catódica. As células foram isoladas do ligamento periodontal de ratos e cultivadas em meio de cultura alfa-MEM contendo antibióticos e suplementado com 10% de FBS, por 72 horas, em atmosfera úmida com 5% de CO2 a 37ºC. No subcultivo as células foram cultivadas sobre os discos de titânio em uma placa de 24 poços, na densidade de 1 x 104 células por poço, incluindo-se controles positivos sem os discos de titânio. Após 24 horas de cultivo, as células foram submetidas à contagem em câmara de Neubauer. Resultados: os resultados mostraram que a média de adesão celular foi maior na superfície controle (0,62±0,22) do que nos grupos polido (0,46±0,14) e nitretado (0,33±0,10). Foi observada diferença estatisticamente significante entre os grupos controle e nitretado (p=0,04), porém não se observou diferença na adesão celular entre os grupos polido e nitretado. Conclusão: a capacidade de adesão das células do ligamento periodontal de rato a superfícies de titânio não sofreu influência do tratamento de superfície dado ao material.

Objective: the present study aims to evaluate, through experiments in vitro, the adhesion capacity of rats periodontal ligament cells on polishing and treated by ionic nitriding (plasma) titanium surfaces. Method: degree II titanium discs (ASTM F86), 15mm of diameter for 1,5mm of thickness, which had received different treatments from surface in 2 distinct groups (polished and cathodic cage plasma nitriding) were used. The cells were isolated from periodontal ligament of rats and cultivated in alpha-MEM contend antibiotic and supplemented with 10% of FBS, for 72 hours, in humid atmosphere with 5% of CO2 at 37ºC. In the subculture the cells were cultivated on titanium discs in 24-well cell culture plates, with a density of 1 x 104 cells per well, including wells with no discs (control). After 24 hours of cultivation, the cells were counted in a Neubauer chamber. Results: the results had shown that the mean adhesion was greater on the control surface (0.62±0.22) than on polished (0.46±0.14) and nitriding (0.33±0.10) surfaces. Statistical significant difference was observed between the groups control and cathodic cage plasma nitriding (p=0.04), nevertheless no diference was found between polished and nitriding groups. Conclusion: the adhesion capacity of rat periodontal ligament cells on the titanium surfaces was not influenced by the different surface treatments given to the material, since none of these contributed positively in the process of cellular adhesion.

Sintomas Locais e SistêmicosAssociados à Erupção Dentária / Local and Systemic Symptoms Associated to Tooth Eruption

Revisar os trabalhos publicados na literaturarelacionando o processo de erupção dentária ao surgimentode possíveis alterações locais e sistêmicas na criança.Material e Métodos: A pesquisa bibliográfica deste trabalhofoi realizada nos bancos de dados eletrônicos: Pubmed,Science Direct e Scielo. Resultado: Embora em muitos casosa exata relação desses achados com o processo eruptivonão esteja cientificamente estabelecida e represente umacoincidência de eventos, alguns distúrbios decorrentes daerupção dentária, como o prurido gengival, são inegáveis eevidenciadas com muita frequência na prática clínica. Outrasassociações diretas de sintomas parecem pouco prováveis,mas é necessário entender que a cavidade oral da criança éum órgão extremamente complexo, em contínuodesenvolvimento, que apresenta uma relação dinâmica comoutros sistemas orgânicos. Conclusão: Na maioria dos casosa sintomatologia da erupção dos dentes decíduos é leve etransitória. Caso ocorra uma exacerbação da mesma,promovendo variações bruscas no estado de normalidade,a criança deve ser avaliada a fim de descobrir a real etiologiadesses sinais e sintomas...

The eruption is a complex process that promotes the migrationof tooth from the intraosseous position on the jaw to itsfunctional position in the oral cavity. The relation betweentooth eruption and the emergence of local and systemicchange is a controversial subject in literature. The aim of thisstudy was to review the papers published in the literaturerelating the process of tooth eruption to the emergence ofpotential local and systemic changes in the child. Thebibliographical research of this study was accomplished inthe electronic databases: Pubmed, Science Direct and Scielo.Although in many cases the exact relation of these findingswith the eruption is not scientifically established, and it seemsmuch more a coincidence of events, some disturbancesresulting from the eruption, such as itching gums, areundeniable and frequently evident in clinical practice. Otherdirect associations of symptoms seem unlikely, but it isnecessary to understand that the oral cavity of children is anextremely complex organ in continuous development, whichpresents a dynamic relation with other systems. In most casesthe symptoms of deciduous teeth eruption are mild andtransient. In the event of an exacerbation, promoting rapidchanges in the normal state, the child should be evaluated inorder to discover the real etiology of these signs andsymptoms...

Fibroma de células gigantes: análise epidemiológica de 309 casos / Giant cell fibroma: an analysis of 309 cases

O fibroma de células gigantes (FCG) é uma lesão fibrosa benigna da mucosa bucal, geralmente assintomática, pediculada, com superfície lisa ou verrucosa, que pode ser confundida clinicamente com o papiloma. Microscopicamente, as células do FCG apresentam prolongamentos citoplasmáticos dendríticos amplos e há uma proliferação de células fusiformes e estrelárias grandes. O epitélio de revestimento usualmente apresenta-se atrófico e exibe projeções papilares delgadas para o interior do conjuntivo. No presente estudo foram avaliados os achados clínicos de 309 casos de FCG, diagnosticados no Serviço de Patologia Cirúrgica ou da Disciplina de Patologia Bucal da Faculdade de Odontologia da Universidade de São Paulo (FOUSP), no período de 12 anos (1994 a 2005). A partir das fichas clínicas do arquivo do serviço foram coletadas as informações referentes ao sexo, à idade e à raça dos pacientes, localização, tamanho e diagnóstico clínico da lesão. Observou-se uma ligeira predileção pelo sexo feminino (55,7% dos casos), ocorrendo mais frequentemente na quarta e quinta décadas de vida, em pacientes da raça branca (73,8%), com localização preferencial na língua (28,8%), seguida da gengiva (25,3%) e mucosa jugal (16,8%). A maior parte das lesões (45,6%) apresentava entre 4 e 6 mm de diâmetro. As hipóteses diagnósticas clínicas mais comuns incluíram fibroma (50,2%), hiperplasia fibrosa inflamatória (37,5%) e papiloma (25,9%). A frequência do fibroma de células gigantes em mucosa bucal justifica a importância de conhecer melhor a lesão

Efeito do Envelhecimento na Expansão In Vitro de Células Hematopoéticas da Medula Óssea / Effect of Aging on the In Vitro Expansion of Bone Marrow Hematopoietic Cells

O presente estudo teve como objetivo avaliar ainfluência do envelhecimento sobre a capacidade proliferativade células hematopoéticas obtidas da medula óssea decamundongos. Material e Métodos: foram comparados doisgrupos de animais: jovens (30 dias de idade) e senis (18meses de idade). Extratos de medula óssea foram coletadosdo canal medular de tíbia e fêmur dos animais e as célulashematopoéticas foram cultivadas e contadas nos intervalosde 24, 48 e 72 horas. Resultados: os resultadosdemonstraram que nos animais jovens a curva decrescimento celular mostrou tendência proliferativa, porémnos animais senis essa curva se mostrou decrescente, comuma queda acentuada no intervalo de 72 horas de cultivo.Conclusão: conclui-se que a idade avançada do animalexerceu uma influência negativa no rendimento in vitro decélulas hematopoéticas da medula óssea, o que poderepresentar um fator importante a ser considerado nosprotocolos que utilizam essas células para terapia de doençasdo sistema hematopoético...

This study aimed to evaluate the influence of agingon the proliferative capacity of hematopoietic cells obtainedfrom mice bone marrow. Material and Methods: two groupsof animals were compared: young (30 days old) and senile(18 months old). Bone marrow extracts were collected fromthe medullary cavity of the tibia and femur of the animals andthe hematopoietic cells were cultured and counted in intervalsof 24, 48 and 72 hours. Results: The results demonstratedthat in young animals the growth curve of the cells showeda proliferative trend, but in senile animals it was observed adecreasing curve, with an intense fall in the 72 hours interval.Conclusion: it’s concluded that the advanced age of theanimal exerts a negative influence in the in vitro yield of bonemarrow hematopoietic cells, which may represent an importantfactor to be considered in protocols that use those cells fortherapy of diseases affecting the hematopoietic system...